G-CSF是一種造血生長因子,可控制粒細胞的生成、分化和功能,并增強成熟末端細胞的功能活性。已發現G-CSF基因有三種轉錄變體,編碼三種不同的亞型。粒細胞/巨噬細胞集落刺激因子是一種細胞因子,通過控制血液中兩種相關白細胞群(粒細胞和單核-巨噬細胞)的產生、分化和功能,在造血過程中發揮作用。
標記:
1.將細胞培養基與EdU溶液按照500:1的比例混合,制成2×EdU標記培養基。
2.提前將2×EdU標記培養基預熱,然后將150微升2×EdU標記培養基與等體積細胞培養基混合,獲得1×EdU溶液。
【注】:
①不建議替換全部培養基,這樣可能會影響細胞增殖的速度。
②配置好的培養基建議現用現配,用量以沒過細胞為宜。
3.孵育細胞2h,棄培養基。
【注】:
①培養時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態。
②大多數腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2h的孵育時間。
4.以1xPBS清洗細胞兩次,每次5min,以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】:對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。
實驗步驟:
1.將細胞以104-105個細胞/孔的密度接種在96孔板中,加入100μL培養基,含或不含待測化合物。在CO2培養箱中在37℃下培養細胞24小時。
2.向板中加入10μL不同濃度的待測物質。
3.在培養箱中將培養板培養適當時間(如6、12、24或48小時)。
4.向板的每個孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5.將平板在培養箱中孵育1-4小時。
6.在讀板之前,在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7.使用酶標儀測量450nm處的吸光度。